4/2 گرم در لیتر

8/7

3/8

6/3 گرم در لیتر

9/7

9/10

8/4 گرم در لیتر

2-5-ارزیابی صفات مورفولوژیک
به منظور اندازه گیری میزان افزایش قطر، ارتفاع و تعداد برگ سبز گیاهان مورد نظر، قبل از شروع اعمال تیمار شوری، قطر و ارتفاع آنها اندازه ­گیری شد و تعداد برگ­های سبز آنها یاداشت گردید و مجددا صفات مورد نظر در پایان آزمایش اندازه ­گیری شدند و مقادیر افزایش یافته محاسبه شدند .
میزان تراکم برگ روی شاخه اصلی، از طریق تقسیم تعداد برگ­های گیاه بر ارتفاع آن، بر حسب تعداد برگ در سانتیمتر مربع محاسبه شد .
به منظور اندازه گیری میزان نکروزه شدن برگ­ها، تعداد برگ­هایی با میزان نکروزه شدگی کمتر از 50 درصد و 50 تا 100 درصد شمارش و درصد آنها در پایان آزمایش محاسبه شد. همچنین به منظور اندازه ­گیری میزان ریزش برگ، در طول مدت آزمایش، تعداد برگ­های ریزش یافته تا پایان آزمایش یادداشت و مقدار آن­ها محاسبه شد. تعداد برگ­های از طریق فرمول زیر (1-2) محاسبه شد .
(1-2) 100 (برگ هایی با نکروزه شدن 50 تا 100 درصد+ برگ های با نکروزه شدن کمتر از 50 درصد + برگ های ریزش یافته) - تعداد کل برگ ها = درصد برگ های سبز
به منظور اندازه ­گیری وزن تر و خشک برگ­ها، شاخه اصلی و انشعابات شاخه اصلی، 8 برگ از قسمت بالای شاخه، (واقع در گره­هاي پنجم و ششم انتهاي شاخه اصلي)، و 8 برگ از قسمت پایینی شاخه (انتهایی ترین برگ­های شاخه اصلی)، شاخه اصلی و انشعابات شاخه اصلی در پایان آزمایش از گیاهان جدا و وزن شدند و سپس به مدت 48 ساعت در دمای 75 درجه سانتی گراد قرار داده شدند و وزن خشک آن­ها محاسبه شد ]موسوی و همکاران، 1388[.
به منظور اندازه گیری وزن تر و خشک ریشه، پس از خارج نمودن آن­ها از داخل خاک، ریشه­ها از محل اتصال آنها به طوقه جدا و کاملا با آب مقطر شست و شو داده شدند و بعد از حذف رطوبت اضافی، وزن تر آنها اندازه گیری شد. سپس به مدت 48 ساعت در دمای 75 درجه سانتی گراد قرار داده شدند و وزن خشک ریشه­ها محاسبه شد .
به منظور اندازه گیری سطح برگ گیاهان، 8 برگ از قسمت بالایی شاخه، (واقع در گره­هاي پنجم و ششم انتهاي شاخه اصلي)، و 8 برگ از قسمت پایینی شاخه (انتهایی ترین برگ­های شاخه اصلی)، انتخاب و سطح برگ آن­ها در پایان آزمایش با بهره گرفتن از دستگاه سنجش سطح برگ مدل ((LI-Cor, Li 1300, USA ، انداره گیری شد .
به منظور محاسبه نسبت سطح برگ، برگ‌هايي كه سطح برگ آنها محاسبه شده بودند، به مدت 48 ساعت در دمای 75 درجه سانتی گراد خشک شدند و سپس وزن خشک برگ گیاهان محاسبه شد. از تقسيم سطح برگ بر حسب سانتیمتر مربع بر وزن خشك بر حسب گرم، نسبت سطح برگ محاسبه شد .
2-6-ارزیابی صفات فیزیولوژیک
2-6-1- پارامترهای فلورسانس کلروفیل
به منظور اندازه گیری پارامترهای فلورسانس کلروفیل در هر گیاه، نمونه گیری از برگ­های شاخه اصلی شامل برگ­های بالایی (برگ­های توسعه یافته از گره­های 4 و 5) و برگ­های پایینی (پایین ترین برگ­ها در شاخه اصلی) انجام شد. ابتدا گيره­هاي دستگاه اندازه­گيري فلورسانس كلروفيل (مدل، Hansatech Instrument ساخت انگلستان) به برگ­ها وصل شدند بطوریکه قسمتی از برگ مورد نظر به مدت 30 دقیقه در تاریکی قرار گرفت. سپس با بهره گرفتن از دستگاه اندازه گیری فلورسانس، Act.Light به برگ تابیده شد و مقدار FO (فلورسانس حداقل) و Fm (فلورسانس حداکثر)، قرائت شدند. مقدار Fv (فلورسانس متغیر)، از تفاضل Fm وFO محاسبه شد .
2-6-2- سنجش کلروفیل و کارتنوئید
به­منظور انداره­گیری میزان کلروفیل­های a، b، کل و کاروتنوئید، ابتدا مقدار نيم گرم از بافت تازه برگ­های بالایی (برگ­های توسعه یافته از گره­های 4 و 5) و برگ­های پایینی (پایین ترین برگ­ها در شاخه اصلی) در هاون چيني ريخته شد. سپس نمونه­های گیاهی با بهره گرفتن از نيتروژن مايع خرد شده و توده يکنواختي بدست آمد. بيست ميلي ليتر استون 80٪ به نمونه­ها اضافه شد و سپس محلول حاصل با سرعت6000 دور در دقيقه به مدت 10 دقيقه سانتريفيوژ شد. عصاره فوقاني حاصل از سانتريفيوژ به بالن شيشه­اي منتقل شد. مقداري از نمونه داخل بالن در کووت اسپکتروفتومتر ريخته شد و در نهايت مقدار جذب در طول موج­هاي 663 نانومتر (2-2)، ۶۴۵ نانومتر (2-3) و 470 نانومتر(2-4)، توسط دستگاه اسپکتروفتومتر (Canada BT600 Plus,)، اندازه گیري شد (Arnon, 1949).
Chlorophyll a (mg/g)= (19.3 _* A663 - 0.86 _* A645) V/100W (2-2) Chlorophyll b (mg/g)= (19.3 _* A645 - 3.6 _* A663) V/100W (2-3) Carotenoides (mg/g)= 100(A470) - 3.27(mg chl. a) - 104(mg chl. b)/227 (2-4)
6-3-شاخص کلروفیل
شاخص کلروفیل در برگ­های بالایی و پایینی شاخه اصلی با بهره گرفتن از کلروفیل متر (Spad 502 Minolota) اندازه گیری شد. بدین منظور در هر گیاه، سه برگ از قسمت بالایی شاخه (برگ­های توسعه یافته از گره­های 4 و 5) و سه برگ از قسمت پایینی شاخه (پایین ترین برگ­ها در شاخه اصلی)، در پایان آزمایش، انتخاب شدند و میزان شاخص کلروفیل در سه نقطه ابتدا، وسط و انتهای از هر برگ توسط دستگاه کلروفیل­متر قرائت گردید. در نهایت، میانگین اين اعداد به عنوان عدد كلروفيل متر مربوط به آن گیاه ثبت شد.
2-6-4-محتواي نسبي آب برگ (LRWC)
به منظور اندازه­گيری محتوای نسبی آب برگ، از هر گياه 4 برگ کامل از قسمت بالایی شاخه و 4 برگ کامل از قسمت پایینی شاخه اصلی در پایان آزمایش، انتخاب شدند. پس از اندازه­گيری وزن تر (FW)، به مدت 24 ساعت در دمای 4 درجه سانتی ­گراد در داخل آب مقطر در شرايط تاريکی قرار داده شدند تا آماس نمايند. بعد از خارج کردن برگ­ها از آب مقطر و حذف رطوبت اضافی، وزن آماس آن­ها اندازه­گيری شد (TW). سپس نمونه­ها به مدت 24 ساعت در دمای 105 درجه سانتی ­گراد قرار داده شدند تا وزن خشک (DW) آن­ها اندازه­گيری شود. در نهایت ميزان نسبی آب برگ از طریق رابطه زير محاسبه شد (2-5)، .
 (2-5)
2-6-5- نشت یونی نسبی
به منظور اندازه گیری نشت یونی نسبی، 5/0گرم از برگ­های قسمت بالایی (برگ­های توسعه یافته از گره­های 4 و 5) و برگ­های قسمت پایینی شاخه (پایین ترین برگ­ها در شاخه اصلی)، در پایان آزمایش، از هر ژنوتیپ جداگانه وزن و در داخل ویال­های شیشه ای ریخته شدند و 25 میلی لیتر آب مقطر به آن­ها اضافه شد. نمونه­ها به مدت 24 ساعت درون شیکر با دمای 24 درجه سانتی ­گراد و با سرعت 120دور در دقیقه قرار داده شدند و پس از 24 ساعت میزان هدایت الکتریکی اولیه (Lt)، آن­ها به وسیله دستگاه EC متر دیجیتالی (مدل Metrohm 644) اندازه ­گیری شد. سپس نمونه­ها به مدت یک ساعت در حمام بن ماری در دمای 120 درجه سانتیگراد قرار داده شدند و مجددا به مدت دو ساعت شیکر شدند و میزان هدایت الکتریکی نهایی (LO) آنها اندازه ­گیری شد و در نهايت درصد نشت يونی طبق فرمول زیر محاسبه شد (2-6)، .
(2-6) 100×(LT/LO)
2-6-6- درصد آسیب دیدگی غشاء سلولی
بعد از محاسبه درصد نشت یونی نسبی برای هر نمونه، درصد آسیب دیدگی غشاء سلولی در نمونه­های تحت تیمار شوری نسبت به نمونه­های شاهد از طریق رابطه زیر محاسبه شد (2-7):

( اینجا فقط تکه ای از متن پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

=درصد آسیب دیدگی1- [1- (T1/T2)/ 1- (C1/C2)] × 100 (2-7)
که در آن، (T1 و T2) به ترتیب هدایت الکتریکی اولیه و نهایی در نمونه­های تحت تیمار شوری و (C1 و C2)، به ترتیب هدایت الکتریکی اولیه و نهایی در نمونه­های شاهد است .
2-6-7- فنل کل
2-6-7-1- استخراج از بافت برگ
برای استخراج عصاره برگ جهت اندازه‌گیری فنل کل و ظرفیت آنتی­اکسیدانی از روش بخشی و آراکاوا  استفاده شد. مقدار 1 گرم از نمونه­های برگ از برگ­های شاخه اصلی (برگ­های توسعه یافته از گره­های 4 و 5) در پایان آزمایش، با بهره گرفتن از نیتروژن مایع در هاون چینی به پودر نرم تبدیل شد. به پودر حاصل، 4 میلی­لیتر حلال استخراج، متشکل از 85% متانول و 15% استیک اسید، اضافه شد. پس از مخلوط کردن، نمونه­ها برای انجام عمل استخراج به مدت 24 ساعت در یخچال با دمای 4 درجه سانتی ­گراد نگهداری شدند.
سپس بخش روشناور نمونه ها داخل میکروتیوب ریخته شدند و با دور 10000 به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ (مدلEpendorf 5417 R )، شدند. بعد از سانتریفیوژ، بخش روشناور نمونه­ها جداسازی و در داخل میکروتیوب ریخته شدند و جهت انجام آزمایش­های مورد نظر در یخچال با دمای 20- درجه سانتیگراد نگهداری شدند  .
2-6-7-2- تعیین میزان فنل کل با روش اسپکتروفتومتری